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禽流感及其分子生物学诊断研究进展

时间:2019-08-07来源:未知 作者:admin点击:
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!论##综述与专禽流感及其分子生物学诊断探求开展毛湘冰,刘毅,杨惠麟(湖南农业大学动物科技学院,湖南 长沙410128)中邦图书分类号: S 853.74文献标识码: A著作编号:1006799X (2005)04003803禽流感 (简称 AI), 俗称真性鸡瘟

  !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!论##综述与专禽流感及其分子生物学诊断探求开展毛湘冰,刘毅,杨惠麟(湖南农业大学动物科技学院,湖南 长沙410128)中邦图书分类号: S 853.74文献标识码: A著作编号:1006—799X (2005)04—0038—03禽流感 (简称 AI), 俗称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟,是由 A 型流感病毒 (简称 AIV) 引 起的全身性或呼吸器官性流行症, 该病毒附属正粘病毒科流感病毒属, 鸡、 火鸡、 鸭和鹌鹑等家禽及野鸟、 水禽、 海鸟等均可熏染, 而对家养的鸡和火鸡引 起的破坏最为急急, 以至威迫着人类的强壮。AI 行为一种寰宇范畴的禽类疫病, 已受到各邦的侧重,其被邦际兽疫局 (OIE)列为 A类...

  !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!论##综述与专禽流感及其分子生物学诊断探求开展毛湘冰,刘毅,杨惠麟(湖南农业大学动物科技学院,湖南 长沙410128)中邦图书分类号: S 853.74文献标识码: A著作编号:1006799X (2005)04003803禽流感 (简称 AI), 俗称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟,是由 A 型流感病毒 (简称 AIV) 引 起的全身性或呼吸器官性流行症, 该病毒附属正粘病毒科流感病毒属, 鸡、 火鸡、 鸭和鹌鹑等家禽及野鸟、 水禽、 海鸟等均可熏染, 而对家养的鸡和火鸡引 起的破坏最为急急, 以至威迫着人类的强壮。AI 行为一种寰宇范畴的禽类疫病, 已受到各邦的侧重,其被邦际兽疫局 (OIE)列为 A类流行症。 我邦农业部于 1985 年 8 月 7 日颁发的 《家禽家禽防疫条例实行细则》中, 将此病列为第一类流行症。 因为我邦的转换绽放,邦际交易和邦内墟市越趋屡次,因而了然AI 的诊断看待我邦养禽业强壮地成长具有主要的事理。1病原1878 年 Perroncito 初度报道了意大利鸡群暴发本病。 当时称为 “鸡瘟”, 到 1955 年被证明 “ 鸡 瘟” 病 毒实 际 上 就 是 A型 禽流 感病毒。禽流感是由 正粘病毒科 ( Orthomyxoviri-dae)流感病毒属的 A 型流感病毒所引 起的。依据病毒的核卵白 (NP) 和基质卵白 (MP) 抗原性的分歧,将流感病毒分为 A、 B、 C 三个血清型 (也有称甲、 乙、 丙型), 每个型内的毒株都有 NP 和 MP,也即是说 NP 和 MP 具有特异性。 依据病毒血凝素 ( Hemaggiutinin, HA) 和神经氨酸酶 (Neuraminidase, NA) 抗原性的分歧,又将其分为分歧的亚型。 迄今为止,曾经发掘 A 型流感病毒的 HA 起码有 16 种, 阔别以 H1H16定名: NA 至 少 有 9 种, 分 别 以N1N9定名。 目 前已辨别到的禽流感病毒有上千株。AIV 担心稳, 可因 抗原漂 移 ( antigenic-drift)而发作抗原性转化, 从而易于发作致病性更强的生物变异株。 正在分歧宿主间熏染一种以上的 AIV 时, 则病毒于宿主细胞间可发作遗传重组即抗原蜕变 (antigenic shift), 这将导致来自于分歧病毒型 AIV 的 HA 和 NA 基因重组而发作新的病毒型, 即 AIV 有很大的变异性。2分子生物学诊断时间禽流感诊断的古代举措有: 临床及病变诊断、病毒的辨别及毒力的占定诊断 (病原学诊断)、 血清学诊断 (免疫学诊断) 和电镜诊断。 然则,这些举措分歧水平的存正在着极少题目,如诊断的凿凿性差、诊断时期长和敏锐性不上等。 近年来, 跟着当代生物时间的成长,分子生物学时间已被大批用于禽流感的迅疾诊断,它可较好的克制以上的差池。2.1集结酶链发应 ( PCR) 及反转录集结酶链反响 (RT!PCR)PCR 是近年来成长成熟起来的一种体外基因扩增时间,能正在数小时内使 DNA 呈指数弥补,已凯旋地用于众种病毒的基因检测和分子盛行病学观察等。 其检测道理为: 寻找83甘肃畜牧兽医2005 年 4 (总 183)期 污染性因子的特异 DNA 序列, 对付测样品实行 PCR 扩增。 要是检测出了相应的扩增带,则判为阳性反响。 反之, 无扩增带则为阴性反响。近几年成长起来的 RT!PCR 分子诊断时间,可从基因程度检测 AIV,具有高度的敏锐性和特异性,并可大大缩短 AIV 的检出时期,克制了古代的 AI 诊断时间搜罗病毒辨别占定试验周期长的差池,为 AI 早期迅疾诊断供应了敏锐、 迅疾、 适用的举措, 并且 Steininger和 Herrmann 试验发掘 RT!PCR 和巢式 RT!PCR 的矫捷度高于病毒辨别和 ELISA, 能够避免极少缺点的阴性结果, Starick 还发掘它能够区别凹凸致病力 AIV。 Choi 等的试验说明众元 PCR 举措能够区别流感病毒的亚型,是一个很好的禽流感病毒亚型区别检测举措。 Kawaoka 行使 PCR 和 Southern biot 试验联络差别 AIV 血凝素基因的序列, 试验顶用于 cDNA 构修的 AIV 质料直接来自 病鸡支气管拭子, 诊断时期只用 2 d, 崔尚金等树立了一种直接检测禽粪样和鸡胚尿囊液中 AIV!H7 亚型 RNA 的 RT!PCR 反响, 并将此法与AGP 和电镜时间作了比拟, 结果说明引 物的特异性决心了产品的特异性, 该举措矫捷度高,检测历程仅需 8 h 掌握, 而且大大缩短了熏染后的检出时期。 Dybkaer 等行使 RT!PCR与 ELISA 相纠合来检测 AIV 的 NP,凿凿性和敏锐性均相当高。 David Suarez 等将 RT!PCR时间与荧光探针检测时间纠合后, 推出 了RRT!PCR ( reai!time, reverse!transcription, poiy-merase chain reaction, 即及时荧光反转灵集结酶链反响)时间, 这种可正在 3 h 内发作诊断结果。 不单如斯, 它的敏锐性远远高于日常的RT!PCR。 本年年头以中科院院士田波为主任委员的专家占定委员会正在深圳留意通告:“禽流感 H5、 H7、 H9 亚型众重 RRT!PCR 检测试剂盒正在深圳研制凯旋”,这意味着我邦禽流感病毒检测得到庞大冲破, 该成绩将让荧光RT!PCR 一次只可检测一个禽流感亚型成为史书,告竣一次同时检测三个禽流感亚型,这活着界上尚属初度, 也有人用 PCR!RFLP 领悟流感病毒, 并以为其正在流感病毒变异探求中具有主要感化。现已树立了能够直接从临床病料的熏染构制中检测 AIV 的 RT!PCR 诊断时间, 可行使于全豹亚型 AIV 熏染的早期迅疾诊断。 此外,还树立了对临床病料或鸡胚接种物中 H5和 H7 亚型 AIV 实行迅疾分型检测的 RT!PCR诊断时间。 Taisuke 等用 RT!PCR 举措来迅疾地测定 HA 裂解位点基因, 用于强毒或弱毒熏染鸡的病料检测时, RT!PCR 均能检出 HA基因,以至对那些用法式举措从鸡胚中检测病毒阴性的病料仍能检测出 HA 基因。 纠合HA 裂解位点的序列领悟, 这种 RT!PCR 举措是用于评判 AIV 致病潜力的理思举措。2.2核酸探针时间核酸分子杂交时间是目前世物化学和分子生物学探求行使最通俗的时间之一, 是定性和定量检测特异性 DNA 或 RNA 的有力东西。 Bashiruddin 等报道了扩增 HA 基因来领悟致病毒株与非致病毒株的分别, 证明了致病毒株与非致病毒株氨基酸的分别。 黄庚明等用 PCR 时间制备了核卵白基因片断 (NPC)的地高辛标识 cDNA 探针, 树立并优化了检测 AIV 的探针杂交法,该探针具有较好的特异性和敏锐性,为从分子程度研讨 AI 的发病机理和临床早期迅疾诊断供应了新的探求措施。2.3依赖核酸序列的扩增 /电化学发光检测时间 (NASBA/ECL)NASBA/ECL ( Nucieic acid seguence!basedampiification with eiectrochemiiuminescent detec-tion)是一项通过继续、等温、 基于酶反响时间来迅疾扩增核酸, 并行使电化学发光反响实行检测的时间。 其可正在分歧原因序列中检测核酸的特定区域, 这项时间极度实用于扩增RNA。 与 RT!PCR 比拟,它可削减样品中克制93Voi.35, N4综述与专论 鸡污染性血虚病探求开展王学理1,2,李朝阳1,龚团莲1(1 . 内蒙古民族大学动物科技学院,内蒙古 通辽028000;2. 解放军军事医学科学院军事兽医探求所)中邦图书分类号: S 853.74文献标识码: A著作编号:1006799X (2005)04004005鸡污染性血虚病 (Chicken Infectious Ane-mia, CIA)又称为血虚因子病、 蓝翅病、 血虚性真皮炎、出血归纳征等,是继鸡污染性法氏囊病 ( infectious bursaI disease, IBD) 之后新出 现的一种鸡的免疫克制病。 该病以血虚、 胸腺萎缩、骨髓黄化、制血性能袭击和免疫性能损害为苛重特色。 自 1979 年 Yuasa 等[1]正在日本初度辨别到鸡污染性血虚病病毒 (ChickenInfectious Anemia Virus, CIAV) 以后, 寰宇很众邦度搜罗我邦接踵说明了该病毒的存正在。 目前,CIA 对养鸡业的破坏不绝上升, 已惹起寰宇各养禽邦度的通俗体贴。1病原特色1 .1形式和理化特色CIA 的 病 原 是 鸡 传 染 性 贫 血 病 毒(CIAV), CIAV 属环状病毒科, 环状病毒属。该科还搜罗猪环状病毒 (PCV) 和鹦鹉喙羽病病毒 ( PBFDV)。 CIAV 是一种无囊膜的直径为 19 ~ 25 nm 的球形病毒, 二十面体构造, 有着细腻的外观构造,而 PCV 和 PBFDV 则无外观构造。 CIAV 衣壳由 32 个构造亚单元构成。 CIAV 病毒粒子正在氯化铯中的浮力密度为 1.33 ~ 1.34 g/mL。 该病毒对理化因子的!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!抵当力很强, 对丙酮、 氯仿、 等脂溶性性物质的影响,下降核酸污染的大概性,并大木缩短检测发作结果的时期。正在禽流感的检测中, NASBA/ECL 还不管AIV 的科系来检测 A 型 AIV 的 H5 和 H7 亚型的血凝素基因比例, 基于母体基因的进一步 NASBA 领悟能检测 AIV 全豹已 知 亚型(H1H15) 的 样品。 NASBA/ECL 的 核酸辨别、扩增及检测的全历程正在 6 h 内即可完毕。此外,这个领悟检测举措是敏锐的、高度特异性的,并且正在检测历程中与体例发育学或临床干系的病毒无交叉反响才具。3结语自 1878 年意大利鸡群暴发禽流感以后,禽流感的发作和盛行已有 100 众年的史书。因为禽流感病毒自然宿主的通俗性及病毒的遗传变异性, 给禽流感的实时定性诊断和防范带来很大的疾苦。 近年来, 寰宇各个地域时时暴发禽流感。 特别是本年春天全寰宇大周围的暴发了禽流感,惹起了强壮的失掉,且因为禽流感病毒对人类的熏染性, 也引 起了极少人的仙游。 我邦脉年已卷入了这回大灾难中,寰宇 15 个省、 市、 自 治区暴发了 禽流感,这大概酿成千亿黎民币的失掉。 看待禽流感,现正在咱们只可采用防范负责的举措,而防范负责 AI 就必需巩固生物平安处理, 探求和行使更优秀、 更科学的分子生物学诊断时间实行 AI 早期监测, 树立寰宇性 AI 监测搜集,庄敬检疫,并有遴选地将下降合群数目与疫苗接种等步伐纠合起来,以避免 AI 的潜正在破坏,确保我邦养禽业的迅疾、安稳成长。04甘肃畜牧兽医2005 年 4 (总 183)期

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